本篇文章為艾佧科技（北京）有限公司（以下簡稱艾佧科技）2022年企業操作技術標準，由艾佧科技原創發布。
艾佧科技作為國家高新技術企業、中關村高新技術企業，為保證制片規范與質量，憑借多年的技術積累與專家經驗，制定了此標準以用于艾佧科技日常工作的標準與規范。
1.范圍
本規范使用技術所指的硬組織，包括；
（1）以松質骨為主要結構的不脫鈣骨組織。
（2）其他含有較軟金屬支架材料的冠狀動脈血管等含金屬材料的組織。
不適用于牙齒、皮質骨以及含較大或堅硬金屬植體的骨組織，帶金屬支架的大動脈或大靜脈血管，其他堅硬的材料。
2.設備與器材
2.1 制樣設備
2.1.1 切片機：自動輪轉式或平推式。
2.1.2 電熱鼓風干燥箱：調溫范圍50℃-200℃。
2.1.3 冰箱：溫度范圍 -20℃- 4℃。
2.1.4 普通光學生物顯微鏡。
2.1.5 通風柜。
2.2 制樣工具
2.2.1 鎢鋼刀：40゜
2.2.2 不銹鋼尖鑷子。
2.2.3 粘附載玻片。
2.2.4 小毛刷。
2.2.5 記號筆。
2.2.6 壓片器。
2.2.7 Ⅰ型或圓形樣本夾。
2.3 材料
2.3.1 組織固定劑
a）中性福爾馬林組織固定液；
b）70%酒精。
2.3.2 組織脫水透明劑
a）酒精，使用濃度：50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100%；
b）二甲苯；
警告——對人體有害，應在通風柜中使用。
c）丙酮。
警告——對人體有害，應在通風柜中使用。
2.3.3 樹脂浸潤包埋劑
a）甲基丙烯酸甲酯；
b）鄰苯二甲酰二丁酯；
c）過氧化苯甲酰；
d）聚甲基丙烯酸甲酯；
e）N,N,3,5-四甲基苯胺；
f）1-金剛烷硫醇。
警告——以上試劑均對人體有害，應在通風柜中使用。
2.3.4 脫塑劑
a）乙二醇乙醚乙酸酯；
b）乙二醇甲醚乙酸酯。
警告——以上試劑均對人體有害，應在通風柜中使用。
2.3.5 自凝樹脂。
警告——對人體有害，應在通風柜中使用。
2.3.6 載玻片規格：25mm×75mm，厚1mm-1.2mm。
2.3.7 蓋玻片規格：24mm×24mm，24mm×32mm，厚0.13mm-0.17mm。
3.制片步驟
3.1 登記編號與組織分切
3.1.1 制作人員驗收標本時，應仔細核對組織標本數量、實驗編號等信息，并與受理人或送樣人核對是否一致并確認。如有不同者，應立即與受理人或送樣人聯系予以調整修改。
3.1.2 按與送樣人確定的分切方向，對組織進行分切，登記編號，將組織放置于脫水盒中，開始脫水。
3.2 組織脫水浸潤包埋
3.2.1 根據組織大小及取材部位，選擇正確的脫水程序，由低濃度酒精到高濃度酒精順序，去除組織內水份。
3.2.2 脫水后的組織經二甲苯進行透明，去除組織內的脂質。
3.2.3 經透明后的組織，于甲基丙烯酸甲酯與鄰苯二甲酸二丁酯混合液中浸潤，使樹脂完全浸入組織內部，浸潤液按加入聚合催化劑劑量的多少，分為一浸液，二浸液，三浸液，組織在每種浸液中浸潤二天。
3.2.4 浸潤完畢的組織于玻璃容器中包埋，包埋液為新鮮配制的第三浸液。包埋聚合時間一般為3-5天。
3.3 粘固
3.3.1 將包埋好的樹脂塊修整至合適大小，并暴露出組織面，且保證組織塊上下平行。
3.3.2 將修整好的組織塊用自凝樹脂粘接于制作好的底座上。
3.4 切片
警告——切片時容易傷手，應做好防護。
3.4.1 開啟切片機，將組織固定于樣本夾中，于自動輪轉式或平推式切片機上，修整出完整的組織面。
3.4.2 切取5微米厚的薄切片，用不銹鋼尖頭鑷夾取切片，再用毛刷將切片于70%酒精溶液中展平。
3.4.3 將切片撈取在玻璃載玻片上，蓋上塑料薄膜，放置于壓片器中夾緊，于50℃干燥箱中過夜粘固。
3.5 脫塑
3.5.1 次日從干燥箱中取出切片，取下薄膜，放于染色架中。
3.5.2 于乙二醇乙醚乙酸酯或乙二醇甲醚乙酸酯中脫去樹脂。
3.6 染色
硬組織切片可以進行石蠟切片所能進行的全部染色，只是染色時間等條件做相應調整。
4.質量標準
4.1 組織脫水透明及浸潤
組織脫水應充分，二甲苯透明要適度，浸潤要完全。
4.2 組織包埋塊
組織包埋塊應保證組織位置平正，包埋液體要沒過組織不少于1cm，聚合時無氣泡。
4.3 切片厚度
一般為5微米厚，但為觀察熒光素的切片厚度應為10微米。
4.4 結構
切片應完整，厚度均勻，無裂紋，無破損。
4.5 編號
切片、包埋塊編號應于標本及送樣單一致，并于包埋及切片時再次核對，簽字確認。
4.6 染色
按照染色規范要求對硬組織薄切片進行相應染色，并做相應調整。
5.安全與環保要求
硬組織制片過程中使用的組織分切機、切片機、鎢鋼刀、酒精、甲基丙烯酸甲酯等容易傷人或易發生火災的危險品。應注意制作過程符合安全和環保要求：
a）制片人員分切樣本時，應佩戴口罩，及防護手套；
b）制片人員在切片時，應注意切片刀的位置，取放組織塊時應鎖定切片機，并放下切片刀保護板；
c）制片室應注意通風、防火、配備換氣設備和消防器材；
d）組織處理及制片中產生廢有機試劑，應裝入帶蓋的瓶中，注明標簽，按有關規定統一處理。
2022艾佧科技常規染色技術企業規范、硬組織磨片企業標準規范、骨形態計量與分析企業標準規范，將會陸續推送，敬請期待。
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